Меню

Система для выделения гемокультур HiSafe

Инструкция по применению глюкометра

Fact-checked

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Приобретая глюкометр инструкция по применению должна быть одной из важнейших составляющих всего комплекта. Ведь не всегда понятно как правильно пользоваться этим аппаратом и как его настроить.

Механическая настройка. В этом случае придется немного повозиться. Для начала нужно вставить батарейки. Потому уже настроить дату и время. Делается это просто, необходимо зажать главную кнопку и подождать звукового сигнала. Устройство включиться, а затем на время отключит питание. Далее с помощью кнопок вверх и вниз выставляется дата, время и другие функции. После чего можно приступать к его использованию.

Ланцета вставляется в гнездо, прикручивается и с помощью вращения на аппарате выбирается необходимая отметка для взятия крови на пробу. Затем ланцета оттягивается до упора и становится полностью готовой к использованию. После этого можно начинать забор крови. Тест полоску необходимо вставить в специальный порт. Затем с помощью ланцеты пробивается подушечка пальца, и капли крови наносятся на тест-полоску. Через 8 секунд будет известен результат.

Автоматическая настройка. Ничего сложного в использовании такого устройства нет. Все настраивается автоматически. Забор крови осуществляется точно таким же образом. Поэтому выбирая аппарат, стоит смотреть на личные предпочтения, и отталкиваясь только от них.

trusted-source

[1], [2], [3]

Показания для применения глюкометра

Основные показания для применения глюкометра это сахарный диабет первого и второго типа. Естественно, есть такие приборы, которые показывают и уровень холестерина, а также свертываемость крови.

Но в основном, он применяется людьми, страдающими сахарным диабетом, дл определения содержания глюкозы. Никаких других показаний не имеется. По сути, все становится ясно из самого определения.

Но, несмотря на это, без консультации лечащего врача, использовать аппарат не стоит. Даже отталкиваясь от того, что человек страдает диабетом. Потому что есть ряд причин, по которым его лучше исключить.

В целом же, это универсальное устройство, позволяющее быстро определить уровень сахара. Благодаря этому появилась возможность быстро среагировать в тех ситуациях, когда это жизненно необходимо. Потому что уровень глюкозы может как повышаться, так и понижаться. Прибор в свою же очередь за считанные секунды подтвердит это и позволит человеку ввести инсулин. Поэтому если есть возможность, то использовать данный аппарат необходимо.

Характеристики глюкометров

Основные характеристики глюкометров должны отвечать всем заявленным потребностям пользователя. Так, есть устройства многофункциональные, есть и самые простые. Но каким бы, ни было устройство, важно чтобы оно показывало точный результат.

При покупке глюкометра человек должен обращать внимание на его точность. Для этого тест проводится, не выходя из магазина. Но чтобы удостовериться в этой характеристике полностью, нужно принести с собой лабораторный анализ уровня сахара. Затем можно тестировать прибор, желательно это сделать три раза. Полученные данные не должны отличаться друг от друга более ем на 5-10%, это допустимая погрешность.

Пожалуй, это самая главная характеристика устройства. Важно чтобы результат, полученный им в целом, не превышал 20% барьер. Только лишь после этого можно смотреть на функциональность, дисплей и прочие мелочи.

Устройство может обладать функцией голосового управления, а также звукового сигнала. Кроме того, прибор способен сохранять последние данные и с легкостью выводить их на экран при необходимости. Но как не крути, аппарат должен быть точным.

trusted-source

[4], [5], [6]

Калибровка глюкометра

Как правило, калибровка глюкометра бывает либо по плазме или же по крови. Ничего сложного в этих понятиях нет. В любом случае человеку вовсе не стоит задумываться над этим вопросом.

Стоит отметить, что данная характеристика устанавливается разработчиками, и человек никак не может ее самостоятельно изменить. Так, изначально при проведении лабораторных анализов выполнялось разделение крови на фракции. После этого анализировались компоненты. Поэтому уровень сахара определялся по плазме. Но ведь по отношению ко всему количеству крови, это значение намного меньше.

Так что необходимо понимать, как пользоваться устройствами с различными калибровками. Если прибор проводит анализ по крови, то здесь все просто. Полученное значение является наиболее точным. Но что делать, если результат по плазме. В этом случае полученное значение просто умножается на 1,11.

Естественно, чтобы не мучить себя расчетами и непонятными задачами, лучше сразу выбирать аппарат, который имеет калибровку по цельной крови.

trusted-source

[7], [8], [9]

Как настроить глюкометр?

После того, как покупка была сделана, интересует естественный вопрос, как настроить глюкометр. На самом деле ничего сложного в этом процессе нет. Первым делом нужно установить батарейки.

Теперь можно установить кодирование. При выключенном аппарате стоит поместить порт в базу пора. Необходимо установить его в базу движением вниз. Когда все будет сделано правильно, появиться щелчок.

Далее нужно настроить дату, время и единицы измерения. Для того чтобы зайти в настройки, необходимо зажать главную кнопку на 5 секунд. После чего прозвучит звуковой сигнал, итак, на дисплее появились данные памяти. Теперь нужно еще раз зажать кнопку, пока не будут доступны установочные данные. Перед тем как человек сможет перейти к настройке, прибор на некоторое время отключиться. Во время этого процесс кнопку отпускать нельзя.

Чтобы установить дату достаточно просто использовать кнопки вверх и вниз и таким образом выставить нужное время. Аналогичная процедура повторяется и для единиц измерения. После каждого изменения нужно нажимать главную кнопку, чтобы все данные сохранились.

Далее стоит подготовить ланцетное устройство. Верхняя его часть открывается, и ланцет вставляется в гнездо. Затем откручивается защитный наконечник устройства и прикручивается обратно. Путем вращения на аппарате можно выбрать необходимую отметку для взятия крови на пробу. Ланцетное устройство оттягивается до упора в верхнюю часть и готово к применению.

Теперь можно начинать забор крови. Делается это просто. Тест полоска вставляется в порт до получения звукового сигнала. После чего ланцетное устройство прикладывается к подушечке пальца и прокалывает его. Кровь аккуратно вводится в прибор. Главное чтобы «сырья» не было много, потому что есть вероятность загрязнения порта для кодирования. Каплей крови нужно прикоснуться к входу для ее забора и подержать палец до тех пор, пока не будет слышен звуковой сигнал. Результат на экране появиться через 8 секунд.

Тест полоски для глюкометра

При использовании приборе, тест полоски для глюкометра являются одними из самых важных составляющих. Используют их для определения уровня сахара. Глюкоза попадает на полоску и тем самым образуется электрический ток, на основании которого и производиться исследование.

Приобретать тест-полоски нужно с особой серьезностью. Специалисты рекомендуют обращать внимание на них, а не на сам аппарат. Ведь о качества этих составляющих зависит полученный результат.

Важно иметь некоторые познания и в плане хранения тест-полосок. Для этого стоит учитывать собственные потребности и не покупать лишнего. Вполне достаточно несколько штук на первое время. Главное не допускать, чтобы полоски долгое время контактировали с воздухом или прями солнечными лучами. В противном случае они могут испортиться и дать совсем другой результат.

Еще один важный момент, при выборе тест-полосок стоит учитывать и совместимость с аппаратом. Потому что универсальных составляющих нет, все должно тщательно подбираться. В таком случае устройство сможет показать правильный результат.

Ланцеты для глюкометра

Что собой представляют ланцеты для глюкометра? Это специальные приборы, которые участвуют в процессе прокалывания кожи с целью забора крови на анализ. Данный «компонент» позволяет избежать лишних повреждений кожных покровов, а также болезненных ощущений. Сам ланцет изготовлен из стерильного материала, поэтому он прекрасно подходит для всех.

Иглы прибора должны отличаться минимальным диаметром. Это позволит избежать болезненности. Диаметр игольного пера определяет длину и ширину прокола, а если исходить из этого, то и скорость кровотока. Все иголочки стерилизованы и находятся в индивидуальных упаковках.

С помощью ланцеты можно не только определить уровень глюкозы, но и содержание холестерина, гемоглобина, скорости свертывания и многого другого. Так что в каком-то роде это универсальный продукт. Модель подбирается с учетом имеющегося прибора и цели, для которой ланцета приобретается. Правильный выбор избавляет впоследствии от образования каллюсов и наростов-шрамов.

Во время производства ланцетов учитывается тип и толщина кожи. Поэтому пользоваться такими «компонентами» могут даже младенцы. Это одноразовое средство для индивидуального использования. Так что приобретать ланцету нужно с учетом одноразового прокалывания. Без этого компонента работа аппарата невозможна.

Ручка для глюкометра

Для чего предназначена ручка для глюкометра? Это специальное устройство, позволяющее вводить инсулин в тех случаях, когда человек забыл об этом действии. Ручка может сочетать в себе как электронные, так и механические составляющие.

Набор дозы производится с помощью специального вращающегося колесика. Во время этого процесса набранная доза высвечивается в боковом окошке. На кнопке, которая есть на ручке, расположен специальный дисплей. Он запоминает введенную дозу, и время, когда она была введена.

Это позволит родителям контролировать ввод инсулина своими детьми. Такое изобретение прекрасно подходит для маленьких детей. Доза запросто корректируется с помощью вращения переключателя в обе стороны.

В общем, без этого изобретения было бы не так просто. Приобрести его можно в любом специализированном магазине. В данном случае совместимость прибора и ручки вовсе не важна. Ведь это не составляющая аппарата, а прост его дополнение. Такое изобретение прекрасно подойдет как деткам, так и взрослым. Поэтому приобретая такое устройство, стоит позаботиться и об этом компоненте.

Как пользоваться глюкометром?

В том, как пользоваться глюкометром, нет ничего страшного. Если человек делает это в первый раз, то переживать, явно не стоит. Итак, первым делом нужно сделать прокол кожи ланцетом.

Обычно, эта составляющая идет в комплекте с аппаратом. В некоторых моделях она встроена. После того как прокол выполнен, нужно поднести кровь к тест-полоске. На ней содержаться специальные вещества, которые способны изменить ее цвет, в зависимости от уровня сахара. Опять же, тест-полоска может идти как в комплекте, так и быть встроенной в аппарат.

Необходимо отметить и тот факт, что некоторые приборы позволяют брать кровь не только с пальцами, но и с плеча и предплечья. С этим моментом все понятно. Когда кровь окажется на тест-полоске устройство начнет свою работу, через 5-20 секунд на дисплее будут доступны цифры, показывающие уровень глюкозы. Пользоваться устройством вовсе не сложно. Полученный результат аппарат сохраняет автоматически.

Читайте также:  Смартфоны Fly Вопросы и обсуждения

Срок годности глюкометра

Какой срок годности глюкометра и может ли его каким-то образом увеличить? Что самое интересное этот критерий зависит от того, как человек пользовался прибором. Если его эксплуатировали бережно, но прослужит аппарат не один год.

Правда, в этом выражении есть свои нюансы. Многое зависит и от самой батареи. Так, в основном ее хватает буквально на 1000 измерений, а это равно году работу. Поэтому данный факто стоит учитывать.

В целом же, это такой прибор, который не имеет определенного срока годности. Как и говорилось выше, все зависит о того, как человек с ним обращается. Ведь повредить устройство просто.

Важно следить за его внешним видом. Не допускать использования просроченных компонентов. В этом случае имеется ввиду тест-полоска и ланцета. Все это может значительно снизить время эксплуатации прибора. Поэтому срок его годности напрямую зависит от обращения с ним. Так что, данной информацией стоит располагать, если есть желание использовать аппарат не один год.

Производители глюкометров

Основные производители глюкометров, на которых стоит обратить внимание должны соответствовать некоторым стандартам. Так, в последние годы стало появляться все больше новых приборов. Причем их разнообразие настолько велико, что выбрать лучшие из них практически невозможно. Ведь все они хороши и обладают минимумом недостатков.

Так, недавно появились аппараты компаний Abbott (брэндовая линейка Medisense), Bayer (Ascensia), Johnson & Johnson (One Touch) , Microlife (Bionime), Roche (Accu-Check). Все они являются новинками и обладают усовершенствованным дизайном. Но принципа работы это не изменило.

Стоит обратить внимание на фотометрические приборы Accu-Check Go и Accu-Check Active. Но нужно понимать, что они обладают высокой погрешностью. Так что, лидирующие позиции остаются за электромеханическими приборами. Ряд новинок на рынке, таких как Bionime Rightest GM 500 и OneTouch Select, обладают хорошими характеристиками. Правда, настраиваются они вручную, многие аппараты на сегодняшний день делают это автоматически.

Хорошо зарекомендовали себя Medisense Optium Xceed и Accu-Chek. На такие приборы стоит обратить внимание. Они не дорогие, легкие в использовании, да, причем настолько, что даже ребенок сможет самостоятельно проверять уровень глюкозы. Выбирая аппарат нужно смотреть не на его название, а на функциональные возможности. Более подробно касательно некоторых моделей глюкометров, речь пойдет ниже.

Противопоказания для применения глюкометра

Несмотря на прекрасные отзывы, есть и противопоказания для применения глюкометра. Для определения уровня глюкозы ни в коем случае нельзя брать венозную кровь. Не подойдет для этого и сыворотка, а также капиллярный «материал», который храниться более 30 минут.

Если у человека наблюдается разжижение или сгущение крови, то применять аппарат ни в коем случае нельзя. Аналогичное правило действует и на те моменты, когда человек употребил аскорбиновую кислоту. Результаты могут быть не точными.

Пациентам со злокачественными опухолями стоит отказаться от устройства. То же самое касается людей с тяжелыми инфекциями и массивными отеками. Если есть нарушения в использовании прибора или же его составляющих. Это может повлиять на точность результата.

Да и в целом, без консультации врача этого делать нельзя. Это может привести к осложнению уже имеющей проблемы. Да и многое зависит от того, какой тип сахарного диабета у человека. Ведь некоторым людям все же запрещено использовать данный аппарат.

trusted-source

[10], [11], [12]

Показатели глюкометра

Люди, которые используют это устройство, должны знать основные показатели глюкометра. Естественно, хорошо, когда устройство само «говорит» о том, что уровень глюкозы превышен или же наоборот снижен. Но что делать, если этой функции нет? В таком случае нужно уметь самостоятельно понимать, что же за цифра перед человеком и что она значит.

Так, существует специальная таблица, в которой указаны показания прибора и реальный уровень глюкозы. Шкала начинается от 1,12 и заканчивается 33,04. Но это данные самого аппарата, как по ним понять содержание сахара? Итак, показатель в 1,12 равен 1 ммоль/л сахара. Следующая цифра в таблице 1,68, ей соответствует значение 1,5. Таким образом, показатель все время увеличивается на 0,5.

Визуально понять работу таблицы будет проще. Но лучше всего прибегнуть к покупке аппарата, который автоматически все считает. Для человека, который пользуется прибором впервые, так будет намного проще. Такое устройство не дорогое, позволить его себе могут все желающие.

Отзывы о глюкометрах

Положительны отзывы о глюкометрах, пожалуй, являются самыми распространенными. Потому что сказать ничего плохого об этих приборах нельзя. Они способны в считанные секунды показать уровень глюкозы. Причем если сахар превышен, то с помощью ручки-шприца вводится необходимое количество инсулина.

Ранее контролировать уровень глюкозы было не так просто. Приходилось посещать врача и периодически проходить обследование. Особой возможности самостоятельно следить за сахаром не было. На сегодняшний день это очень просто сделать.

Поэтому отрицательных отзывов касательно этих изобретений и быть не может. Они компактные, что позволяет носить с собой эти аппараты всегда. Благодаря этому проверить уровень сахара можно в любой момент. Никаких неудобств, все быстро и удобно. Пользоваться приборами могут даже дети. На специальных дисплеях высвечиваются данные о последней проверке и вводе инсулина, это очень удобно. Поэтому глюкометр это универсальное и удобное средство, которое имеет только лишь положительные отзывы.

Источник



Signal blood culture system инструкция

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может найти применение для научно-исследовательских и других лабораторий клинической микробиологии при необходимости сохранения прихотливых бактериальных культур Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae в течение длительного времени, в том числе для длительного хранения музейных штаммов.

Практика консервации и расконсервации микроорганизмов эмпирически выработала ряд приемов, основанных на знании механизмов погружения клеток в анабиотическое состояние и выхода из него.

Однако эффективная консервация с полным сохранением популяций и геномов разнообразных микроорганизмов представляет собой пока еще не решенную проблему, нуждающуюся в дальнейшем изучении. Так, известно, что способность сохранять жизнеспособность в определенных условиях консервации связана не только с родом и видом микроорганизмов, но и с другими свойствами бактерий.

Среди методов хранения микроорганизмов, практикуемых в различного ранга коллекциях живых культур, различают два основных подхода:

1. Методы непродолжительного хранения микроорганизмов;

2. Методы длительного хранения микроорганизмов.

1. Методы первой группы позволяют сохранять микроорганизмы от нескольких недель, месяцев до одного года и имеют ряд недостатков, а именно: диссоциация микроорганизмов, загрязнение, неконтролируемая селекция мутантов микроорганизмов, не гарантированный срок сохранения жизнеспособности и т.д. Неправильный выбор поддерживающей среды может привести к потере микроорганизма. Большинство этих методов непригодно для сохранения прихотливых микроорганизмов, таких как S.pneumoniae и Н. Influenzae.

2. Методы длительного хранения микроорганизмов:

— глубокое замораживание, или криоконсервация микроорганизмов (от минус 70°С до минус 196°С);

— лиофильное высушивание (из замороженного состояния) или высушивание из жидкого состояния.

Криоконсервация осуществляется в сосудах с жидким газом (азотом) или в стационарных морозильных камерах. Заморозка проводится путем посева микроорганизмов в специальные среды сохранения с добавлением криопротекторов, обеспечивающих внутриклеточную и (или) внеклеточную защиту микроба от повреждающих факторов в процессе замораживания и размораживания. В качестве среды сохранения используют различные субстраты, но больший процент биомассы микроорганизмов при расконсервации сохраняется при использовании богатых по составу питательных сред [1, 2]. Это особенно важно учитывать при сохранении прихотливых микроорганизмов.

Лиофильное высушивание обеспечивает наиболее длительное хранение микроорганизмов, но выполняется на дорогостоящем оборудовании, что малодоступно для лабораторной практики.

Известны способы хранения прихотливых микроорганизмов:

— на яично-желточной среде Дорсэ при комнатной температуре (до 4-6 месяцев для пневмококков) [3, 4]. Недостатками метода являются — короткий срок хранения, невозможность культивирования Haemophilus influenzae.

— на стерильной дефибринированной крови кролика при температуре ниже минус 40°С [5]. Недостатком метода является то, что стерильная дефибринированная кровь кролика является недоступным препаратом для практических лабораторий.

— на консервированной донорской человеческой цельной крови, содержащей гемоконсервант ЦФДА-1 при температуре минус 20°С [6].

Недостатки способа — возможное содержание антител к возбудителям инфекционных болезней и гибель сохраняемой культуры, низкий срок хранения — один год, невозможность дальнейшего хранения после расконсервации.

Наиболее близким способом к заявляемому является способ сохранения бактерий с использованием 18-24-часовых культур, выращенных на соответствующих питательных средах, путем замораживания при температуре минус 80°С в триптиказо-соевом бульоне с добавлением 30% глицерина [7, 8]. В известном способе используется в качестве среды сохранения триптиказо-соевый бульон в виде сухой среды для приготовления бульона в условиях лаборатории или жидкой среды, готовой к использованию. Недостаток способа — низкая жизнеспособность микроорганизмов при хранении в результате недостаточного набора питательных компонентов в среде сохранения [1].

Задачей разработки является создание наиболее доступного способа длительного хранения прихотливых микроорганизмов для практических и научно-исследовательских лабораторий.

Техническим результатом заявленного способа является сохранение жизнеспособности (выживаемости) прихотливых микроорганизмов при консервации в течение длительного времени.

Технический результат достигается тем, что в способе длительного хранения прихотливых микроорганизмов с использованием 18-24-часовых культур путем замораживания при температуре минус 80°С в среде сохранения с добавлением криопротектора в виде 30% глицерина, в качестве среды сохранения используют готовую среду Signal blood culture system medium производства фирмы Oxoid, первоначально предназначенную для диагностики бактериального заражения крови.

Изучив особенности микроорганизмов установили, что:

Streptococcus pneumoniae нуждается в особых условиях культивирования. К питательным средам обычно добавляют кровь и сыворотку крупного рогатого скота или лошадиную сыворотку, для роста требуется повышенная концентрация СО2. Хранение культур в обычных условиях затруднено вследствие склонности пневмококка к аутолизу.

Бактерии рода Haemophilus также относят к труднокультивируемым микробам — все виды гемофильных бактерий нуждаются в присутствии в питательной среде ростовых факторов V и X, источником которых являются эритроциты крови [1]. Практическим путем подобраны среда сохранения, криопротектор, определена температура криоконсервации.

1. Выбор среды сохранения.

Выбор среды сохранения микроорганизмов основывается на питательных потребностях патогенов. Правильный выбор сред важен как для накопления микроорганизмов (жизнеспособность микроорганизмов значительно повышается, если исходная концентрация микробных клеток в суспензии была высокой, порядка 10 9 -10 11 кл/мл), так и для защиты клеток в процессе криоконсервации и расконсервации. Более концентрированная суспензия клеток имеет более высокий титр выживания при размораживании, чем разбавленная суспензия [9].

Для обеспечения ростовых потребностей Streptococcus pneumoniae в состав искусственных питательных сред должны входить аминокислоты (лизин, аргинин, метионин, треонин, гистидин, глицин, цистеин, аспарагин, изолейцин, валин и глютаминовая кислота). Необходимыми компонентами питательных сред также являются холин, витамины группы В. Учитывая физиологические потребности прихотливых микроорганизмов в качестве основ питательных сред, используются гидролизаты мяса, сои, казеина, куриные эмбрионы, продукты ферментативного гидролиза плаценты человека [1].

Читайте также:  Риностоп Аква Беби для детей 0 от насморка спрей для носа 100 морская вода 125 мл

Несмотря на то, что предложенные среды обеспечивают типичный рост пневмококков и гемофилов, использование в них нестандартизованных компонентов существенно снижает их эффективность. Поэтому эффективное долговременное сохранение прихотливых микроорганизмов возможно только при использовании качественной, богатой по составу питательных веществ и стандартизованной среды [9]. Среда Signal blood culture system medium полностью соответствует этим требованиям.

2. Выбор криопротектора.

Криопротекторы — вещества, способные предотвращать развитие повреждений биологических объектов при охлаждении, замораживании и последующем отогреве. К настоящему времени известно свыше 100 соединений в качестве криопротекторов (спирты, амины, аминокислоты и их амиды, оксиды, углеводы, белки, природные и искусственные полимеры, неорганические соли и др.). Однако многие из известных криопротекторов могут оказывать на клетки токсическое действие, величина которого зависит от температуры и длительности экспозиции клеток с криопротектором. Поэтому, как правило, сразу после оттаивания удаляют криопротектор из клеток и среды путем последовательных отмываний и центрифугирования [10, 11, 12, 13]. В качестве криопротекторов в микробиологии обычно используют 10, 15, 20% растворы глицерина [9, 10]; 5, 7% растворы диметилсульфоксида (ДМСО); 12, 24% растворы сахарозы, а также глицерин и ДМСО в сочетании с глюкозой или сахарозой [9, 10, 11, 14].

Для нашего способа в качестве криопротектора был выбран 30% глицерин, обеспечивающий внутриклеточную и внеклеточную защиту микроорганизмов от повреждающих факторов. Для дальнейшей исследовательской работы с микроорганизмами не требуется отмывать и центрифугировать состав.

3. Определение температуры криоконсервации.

В настоящее время криоконсервация (криоанабиоз) является наиболее перспективным методом долгосрочного хранения микроорганизмов. При криоконсервации удается получить высокий уровень жизнеспособных клеток, титр которых при длительном хранении при температуре от минус 70°С до минус 196°С сохраняется на исходном уровне, что делает практически неограниченным возможное время хранения [10]. Существенным преимуществом криоконсервации перед высушиванием и лиофилизацией является возможность сохранения высокой биохимической активности и генетической стабильности [2]. Наиболее доступным для практических и научно-исследовательских лабораторий методом является криоконсервация в морозильниках при -70°С — 80°С.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят рабочий раствор среды сохранения, используя готовую среду Signal blood culture system medium (производится фирмой Oxoid, Великобритания, каталожный номер ВСО 100 — общее название системы; бутыль в комплекте с индикатором роста — ВСО 100М; флакон со средой без индикатора роста ВСО 102М). Среда представляет собой жидкий стерильный раствор в стерильном флаконе емкостью 84 мл, полностью готовый к использованию в качестве среды сохранения. Среда изначально предназначена для посева крови заболевших лиц с целью выделения даже минимальных количеств прихотливых микроорганизмов. В состав среды Signal blood culture system medium входит: триптонно-соевый бульон 10 г/л, желатиновый пептон 10 г/л, дрожжевой экстракт 5 г/л, мясной экстракт 5 г/л, поваренная соль 8 г/л, нитрат калия 2 г/л, глюкоза 1 г/л, L — аргинин 1 г/л, пируват натрия 1 г/л, желатин 1 г/л, тиогликоль натрия 0,5 г/л, цистеин HCl 0,4 г/л, двууглекислая сода 0,4 г/л, фосфатный буфер 0,3 г/л, полианетол сульфонат натрия 0,3 г/л, дитиотреитол 0,2 г/л, сульфат аденина 0,01 г/л, янтарно-кислый натрий 0,01 г/л, хлорид аммония 0,008 г/л, сульфат магния 0,008 г/л, витамин K(Menadione) 0,005 г/л, рН среды 7,0 [16].

Для приготовления рабочего раствора среды сохранения (среда + криопротектор) среда Signal blood culture system medium наливается стерильным шприцем в количестве 7 мл в стерильную пробирку емкостью 10-15 мл. Затем в эту же пробирку добавляется 3 мл глицерина, предварительно простерилизованного 15 мин при давлении 0,5 атм. Таким образом обеспечивается 30% концентрация глицерина в растворе.

Пробирки типа Eppendorf из полипропилена помещают с открытыми крышками в крафт-пакеты по 10 штук, стерилизуют автоклавированием при t 120°С — 45 мин [15]. Срок хранения стерильных пробирок типа Eppendorf трое суток. Рабочий раствор должен быть сразу разлит в стерильные пробирки типа Eppendorf в ламинарном боксе 2 класса биологической защиты по 1 мл. Далее пробирки типа Eppendorf со средой хранятся в штативе при t+2+8°С 7-10 дней.

Культуры Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae для длительного сохранения предварительно выращивают на кровяном агаре с добавлением 10% лошадиной сыворотки (Streptococcus pneumoniae) и на шоколадном агаре (Haemophilus influenzae) в атмосфере повышенной концентрации СО2 18-24 часа [1].

Стерильным одноразовым тампоном-зондом из вискозы снимают с агара видимый рост бактерий. Затем тампон-зонд помещают в пробирку типа Eppendorf со средой сохранения, интенсивно суспендируют его и вынимают, отжав о внутреннюю стенку пробирки. Пробирки типа Eppendorf с культурой маркируют маркером по стеклу, обозначая название, номер культуры, дату заморозки. Каждый штамм сохранялся в 5 экземплярах, чтобы протестировать жизнеспособность бактерий через 3 мес, 6 мес, 12 мес, 1,5 года и 2 года консервации. При обычном сохранении, исключающем исследовательские задачи по определению выживаемости бактерий, каждый штамм сохраняем в нескольких (от 3 до 5) экземплярах. Подписанные пробирки с культурой без дополнительного подращивания помещают в штатив и затем в морозильную камеру при t-80°C. Для расконсервации сохраняемой культуры одноразовой пластиковой бактериологической петлей прокалывается замороженная среда. Затем взятая на петлю масса растирается по поверхности кровяного (шоколадного) агара штриховым способом. Чашки инкубируют при 137°С в атмосфере повышенной концентрации СО2 18-24 часа. После посева пробирка с замороженной культурой вновь помещается в морозильник.

Нами было протестировано хранение предлагаемым способом 60 штаммов бактерий: 30 штаммов Streptococcus pneumoniae, 30 штаммов Haemophilus influenzae. Результаты исследований, приведенные в таблице 1, показали, что все 60 культур сохранили свою жизнеспособность в течение 2-х лет хранения на испытуемой среде.

Преимуществом заявленного способа является то, что использование среды сохранения на основе среды Signal blood culture system medium, содержащей большой набор питательных компонентов и ростовых факторов, с добавлением 30% глицерина в качестве криопротектора обеспечивает выживаемость в высоком титре максимального количества проб с прихотливыми микроорганизмами, жизнеспособность и возобновление культивирования сохраняемых бактерий в течение минимум 2-х лет хранения. Культуры закладываются на хранение без дополнительного подращивания в термостате, из одной пробирки можно делать высев несколько раз без полного оттаивания, исключен трудоемкий этап «оживления» микроорганизмов после расконсервации. Дополнительным преимуществом является то, что если микробиологическая лаборатория выполняет исследования крови на стерильность с использованием среды Signal blood culture system medium, то можно без дополнительных затрат времени и денежных средств на приобретение другой среды сохранять лабораторные штаммы для последующего изучения.

1. Методики клинических лабораторных исследований. Справочное пособие, Том 3, Клиническая микробиология под редакцией В.В. Меньшикова. М.: Лабора, 2009. — 879 с.

2. В.Д. Похиленко. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития / В.Д. Похиленко, A.M. Баранов, К.В. Детушев // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. — 2009. — №4 (12). — С. 99-121.

3. Wasas A.D., Huebner R.E., De Blanch M, Klugman K.P. Long-term survival of Streptococcus pneumoniae at room temperature on Dorset egg medium. J Clin Microbiol. 1998;36:1139-1140.

4. Ajello G.W., Feeley J.C., Hayes P.S., reingold A.L., Bolan G., Broome C.V., Phillips C.J. Trans-isolate medium: a new medium for primary culturing and transport of Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae. J Clin Microbiol. 1984; 20:55-58.

5. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий (аэробных и факультативно анаэробных). Пер. с англ. Р. Вейант, У. Мосс, Р. Уивер, Д. Холлис, Дж. Джордан, Э. Кук, М. Дейншвар. — М.: Мир, 1999. — 791 с., стр. 56.

6. Патент 2535984 Российская Федерация, C12N 1/04, 2014. Способ длительного хранения прихотливых бактерий в консервированной цельной донорской крови путем замораживания / Воронина Л.Г., Суматова Е.В., Кукушкина М.П.: опубл. 20.12.2014, Бюл. №35.

7. Протасова И.Н. Смена серотипов Streptococcus pneumoniae у детей, вакцинированных 7-валентной конъюгированной вакциной / И.Н. Протасова, Н.В. Бахарева, О.В. Перьянова, Т.А. Елистратова, М.В. Коваль // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. — 2014. — №5(78).-С. 67-71.

8. Маянский Н.А. Определение капсульных серотипов пневмококка методом мультиплексной ПЦР /Н.А. Маянский, Н.М. Алябьева, Л.К. Катосова, Т.А. Гречуха, В.Г. Пинелис, Л.С. Намазова-Баранова // Вопросы диагностики в педиатрии. — 2010. — Том 2. — №6. — С. 6-11.

9. Патент 2123044 Российская Федерация, C12N 1/04, 2011. Способ длительного хранения естественных симбиотических ассоциаций микроорганизмов человека и животных / Шендеров Б.А., Гахова Э.Н., Манвелова М.А., Пиорунский Д.А., Карнаухов В.Н.: опубл. 10.12.1998.

10. Смит О. Биологическое действие замораживания и переохлаждения: пер. с англ. / О. Смит. — М., 1963. — 430 с.

11. А.М. Белоус Криоконсерванты / A.M. Белоус, М.И. Шраго, Н.С. Пушкарь. — Киев: Наукова думка, 1979. — 198 с.

12. Патент 2008348 Российская Федерация, C12N 1/04, 1994. Способ хранения культур микроорганизмов / Афиногенов Г.Е., Доморад А.А., Шамолина И.И., Краснова М.В.; опубл. 28.02.94, Бюл. №4.

13. Патент 2185435 Российская Федерация, C12N 1/04, 2001. Способ хранения культур микроорганизмов / Ильин Д.Ю., Блинохватов А.Ф., Ильина Г.В., Иванов А.И.: опубл. 20.07.02, Бюл. №20.

14. Патент 2045573 Российская Федерация, C12N 1/04, 1995. Состав для хранения бактерий / Плотников О.П., Маркова Л.И., Виноградова Н.А., Харченко В.Г., Казаринова Т.Д.; опубл. 10.10.95, Бюл. №28.

15. ОСТ 42-21-2-85 «Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения. Методы, средства и режимы» стр. 9.

16. Ссылка на источник из уровня техники с описанием среды: http://www.biovitrum.ru/files//instrukciya_sistema_signal.pdf

Способ длительного хранения прихотливых микроорганизмов с использованием 18-24-часовых культур путем замораживания при температуре минус 80°С в среде сохранения с добавлением криопротектора в виде 30% глицерина, отличающийся тем, что в качестве среды сохранения используют готовую среду Signal blood culture system medium производства фирмы Oxoid, первоначально предназначенную для диагностики бактериального заражения крови, которая включает в себя: триптонно-соевый бульон 10 г/л, желатиновый пептон 10 г/л, дрожжевой экстракт 5 г/л, мясной экстракт 5 г/л, поваренную соль 8 г/л, нитрат калия 2 г/л, глюкозу 1 г/л, L-аргинин 1 г/л, пируват натрия 1 г/л, желатин 1 г/л, тиогликоль натрия 0,5 г/л, цистеин HCl 0,4 г/л, двууглекислую соду 0,4 г/л, фосфатный буфер 0,3 г/л, полианетол сульфонат натрия 0,3 г/л, дитиотреитол 0,2 г/л, сульфат аденина 0,01 г/л, янтарнокислый натрий 0,01 г/л, хлорид аммония 0,008 г/л, сульфат магния 0,008 г/л, витамин K (Menadione) 0,005 г/л, рН среды 7,0.

Источник

Система для выделения гемокультур HiSafe

HiSafe Blood Culturing System

Одним из важнейших материалов, поступающих для исследования в микробиологическую лабораторию, является кровь. Известно, что в норме кровь стерильна, поэтому выделение гемокультуры имеет принципиальное значение для диагностики, в частности, таких состояний, как эндокардит, тифо-паратифозные заболевания и сальмонеллезы, пневмония, осложненный нагноением тромбофлебит, инфекции, связанные с пластикой сосудов и др. (1). Ввиду того, что концентрации микроорганизмов в крови при бактериемиях, как правило, невысоки, для посева необходимо брать достаточно большое количество крови. Естественная бактерицидная/бактериостатическая активность крови, наряду с предшествующей антибиотикотерапией, могут быть причиной отрицательного или несвоевременно полученного положительного результата исследования на гемокультуру (2). Соответственно, для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта можно применять такое вещество, как SPS (натрия полианетолсульфонат) (3, 4, 5). SPS подавляет активность стрептомицина (6), полимиксина В, канамицина и гентамицина. Полезность SPS для выделения гемокультур первыми показали Van Haebler и Miles.

Читайте также:  23 Устройство настольного горизонтально фрезерного станка

Система для выделения гемокультур HiSafe предназначена для быстрого, эффективного и простого выделения гемокультур и их предварительной идентификации. Все питательные среды, входящие в систему ХайСейф (смотри ниже), специально разрабатывались для выращивания разнообразных клинически значимых микроорганизмов, как неприхотливых, так и прихотливых видов.

Методика

Кровь у больного берут (предпочтительно до назначения антимикробной терапии) стерильным инструментом и асептично переносят во флакон системы HiSafe, содержащий соответствующую питательную среду (выбор среды зависит от свойств предполагаемого возбудителя). Засеянные флаконы инкубируют в термостате и отмечают появление мутности, изменение цвета среды, гемолиза и/или газообразования.

Взятие материала

  • Кровь берут предпочтительно до назначения антимикробной терапии. Если антибиотики уже назначены, кровь берут непосредственно перед очередным введением антибиотика.
  • Кровь берут натощак, так как хилезная кровь может маскировать рост в жидкой среде.
  • Кровь берут в определенные промежутки времени, особенно рекомендуется это делать при появлении симптомов лихорадки.
  • Может потребоваться многократное взятие крови (2-3 раза) в определенные промежутки времени.
  • Руки персонала должны быть чистыми и сухими. Поскольку имеется опасность заражения персонала такими инфекциями, как гепатит В и ВИЧ-инфекция, оператору следует пользоваться стерильными перчатками.
  • Место инъекции дезинфицируют, тщательно обрабатывая его тампоном, смоченным 70%-ным раствором изопропанола или этанола и 2%-ным раствором иода. Перед введением иглы кожа должна высохнуть.
  • Используя стерильную (лучше одноразовую) иглу, у больного берут следующее количество крови:

  • Для каждого больного, а также для повторных пункций используют новую стерильную (лучше одноразовую) иглу и шприц.
  • Для получения наилучших результатов выделения гемокультур отобранную кровь желательно сразу засевать во флаконы системы HiSafe, лучше непосредственно у постели больного.
  • В случае задержки посева исследуемую кровь оставляют при комнатной температуре.

Ход исследования

1. Подписывают флакон со средой для гемокультуры
2. Крышку флакона не отвинчивать! Удаляют только верхнюю часть крышки.
3. Открывшуюся часть резиновой пробки дезинфицируют.
4. Стерильной (одноразовой) иглой и шприцем берут кровь больного, как описано выше.
5. Немедленно переносят кровь во флакон с питательной средой, прокалывая резиновую пробку той же иглой.
6. Аэрация: используют стерильную вентиляционную иглу (LA038). На резиновую пробку флакона, установленного вертикально (желательно это делать в ламинарном боксе), помещают смоченный спиртом тампон и через него вводят во флакон вентиляционную иглу с фильтром. Введение и удаление иглы проводят по прямой линии. Иглу удаляют, а содержимое флакона осторожно перемешивают, перевернув флакон 2-3 раза.
Флаконы для культивирования анаэробов вентилированию не подлежат !
7. Инкубируют посевы при 35± 2° С 18-24 ч и далее, в течение 7 суток.

Учет результатов

Признаки роста появляются обычно через 48 ч. Для подтверждения отрицательного результата флаконы продолжают инкубировать в течение 7 дней. Для идентификации выделенных гемокультур требуется посев на соответствующие дифференциальные среды.

Примечание: схемы идентификации выделенных гемокультур можно найти в соответствующих Руководствах (7 и др.).

Возможные причины ложного результата

На выделение гемокультуры оказывают влияние разные факторы:

  • Предшествующая антимикробная терапия
  • Транзиторный характер бактериемии
  • Контаминация крови больного из внешних источников
  • Объем отобранной крови
  • Выбор неподходящей среды для культивирования
  • Преждевременное выбрасывание “отрицательных” посевов

Важные указания: используют только для диагностики in vitro.

Не использовать флаконы с трещинами или другими дефектами, а также с признаками контаминации питательной среды. Перед выбрасыванием все флаконы необходимо обеззараживать автоклавированием при 1 атм (121° С) в течение 15 мин. Перед автоклавированием отвинчивают крышку флакона и приоткрывают его резиновую пробку.

Двойная среда HiCombi LQ033 (предназначена для детских анализов) и LQ012 (предназначена для взрослых анализов) :

Представляет собой флакон (стеклянный или поликарбонатный) с комбинацией 7мл агара, омываемого 20 мл бульона (LQ033) 20 мл агара, омываемого 40 мл бульона (LQ012). Бульонные среды богаты факторами роста, что позволяет выращивать как факультативные, так и облигатные анаэробы, вызывающие бактериемию. Специальный пептон является источником различных аминокислот, дрожжевой экстракт – витаминов, а гемин и НАД являются факторами роста таких прихотливых микроорганизмов, как Haemophilus spp. Комбинированная среда рекомендуется для получения быстрого роста энтеробактерий, псевдомонад, стафилококков, стрептококков и грибов Candida.

Состав сред **

Ход исследования (рекомендуется для всех двухфазных сред HiCombi)

1. Засеять среду, как описано для системы HiSafe.
2. Инкубировать при 35± 2° С в течение 4-6 ч. Наклонить систему так, чтобы поверхность агара была смочена бульоном.
НЕ ВСТРЯХИВАТЬ СИСТЕМУ И НЕ ДЕРЖАТЬ В НАКЛОННОМ ПОЛОЖЕНИИ БОЛЕЕ 15 СЕКУНД.
3. Придать системе вертикальное положение и инкубировать при 35± 2° С в течение 18-24 ч или дольше (при необходимости).
4. Для выделения культур аэробов можно применять аэраторы, как это описано для системы HiSafe.

Источник

Коронавирус SARS-CoV-2, нейтрализующие антитела IgG к RBD домену S-белка (Architect, Abbott) (кол.) в Москве

Количественное определение уровня антител класса IgG к рецептор-связывающему домену (RBD) S-белка бета-коронавируса SARS-CoV-2 в сыворотке крови методом хемилюминесцентного иммуноанализа на микрочастицах. Исследование может быть использовано для количественной оценки гуморального иммунного ответа у пациентов после перенесённой коронавирусной инфекции, а также после иммунизации против COVID-19 вакциной «Гам-КОВИД-Вак».

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Коронавирус SARS-CoV-2, нейтрализующие антитела IgG к RBD домену S-белка (Architect, Abbott) (кол.)?

  • Вспомогательное исследование при диагностике COVID-19.
  • Выявление факта перенесённой инфекции SARS-CoV-2.
  • Оценка гуморального иммунного ответа после вакцинации от COVID-19.

Подробное описание исследования

SARS-CoV-2 – это бета-коронавирус семейства Coronaviridae. Вирион, или вирусная частица, представляет собой генетический материал – рибонуклеиновую кислоту (РНК), – связанный со специальным нуклеокапсидным белком (N-белком), упакованный в сферическую белковую оболочку.

На внешней поверхности оболочки вириона находятся «шипы», образованные S-белком (от английского Spike – шип). Благодаря «шипам» происходит проникновение вириона в клетку. S-белок состоит из двух функциональных субъединиц: S1 (содержащая RBD-домен) обеспечивает связывание с рецептором клетки-мишени, S2 способствует слиянию вируса и клеточной мембраны. Также с S-белком, способным самостоятельно циркулировать в крови и даже проникать через гематоэнцефалический барьер, связывают нарушения в системе гемостаза и иные патологические состояния у больных и переболевших COVID-19.

Как правило, инфекционный процесс начинается после проникновения вируса в эпителиальные клетки, выстилающие слизистые оболочки верхних дыхательные путей. В зараженных клетках начинается активная репликация вируса – многократное увеличение числа копий вирусных частиц, или вирионов. Новые вирионы выходят из пораженных клеток и заражают все большее количество здоровых клеток уже не только верхних, но и нижних дыхательных путей. В том числе возможно поражение альвеолярных клеток II типа, что определяет развитие пневмонии.

Вирионы SARS-CoV-2 способны проникать в клетки, на поверхности которых присутствует мембранный белок ангиотензинпревращающий фермент II типа (АПФ2, ACE2), который служит рецептором для вирусной частицы. АПФ2 представлен на оболочках клеток органов дыхательной и центральной нервной системы, пищевода, подвздошной кишки, почек, мочевого пузыря, сердца. Новый коронавирус способен поражать нервные клетки, в том числе клетки головного мозга, с чем связывают расстройство восприятия запахов у некоторых пациентов.

Инфекция SARS-CoV-2 может протекать бессимптомно (до 50% случаев), в легкой и в тяжелой формах. В последнем случае возможно развитие острого респираторного синдрома (Severe Acute Respiratory Syndrome, SARS) на фоне двусторонней пневмонии. Инкубационный период длится 2–14 суток, чаще 5–7 суток. После чего у пациента появляются симптомы острой респираторной вирусной инфекции (ОРВИ).

Все инфицированные коронавирусом, даже те, у кого инфекция протекает в стёртой или в бессимптомной форме, являются источником инфекции уже в первые дни после заражения. Так как они выделяют вирусные частицы в окружающую среду с выдыхаемым воздухом, при разговоре, кашле, чихании. Вирусовыделение в среднем продолжается около 20 суток, однако в отдельных случаях может продолжаться дольше месяца.

В связи с тем, что новая коронавирусная инфекция пока недостаточно изучена, а также с коротким сроком применения вакцин, пока достоверно не известен срок циркуляции в крови нейтрализующих антител.

Особенности и преимущества методики

SARS-CoV-2 IgG II Количественный Реагенты для ARCHITECT, Abbott.

Использованная литература

  1. Временные методические рекомендации. Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19). Версия 10. 08.02.2021.
  2. Lize M. Grobbelaar et al. SARS-CoV-2 spike protein S1 induces fibrin(ogen) resistant to fibrinolysis: Implications for microclot formation in COVID-19/ medRxiv, 2021.
  3. Elizabeth M. Rhea et al. The S1 protein of SARS-CoV-2 crosses the blood-brain barrier in mice/ Nature Neuroscience, 2021, Vol. 24, pp. 368–378.
  4. Andrey V. Letarov et al. Free SARSCoV2 Spike Protein S1 Particles May Play a Role in the Pathogenesis of COVID19 Infection/ Biochemistry (Moscow), 2021, Vol. 86, No. 3, pp. 257–261.
  5. https://www.rospotrebnadzor.ru/about/info/news/news_details.php?ELEMENT_ID=15649
  6. https://sputnikvaccine.com/rus/
  7. Материалы производителя тест-системы.

Другие названия этого исследования

Quantitative detection of neutralizing IgG antibodies to the spike (S) protein of SARS-CoV-2

Подготовка к исследованию

  • Кровь рекомендуется сдавать утром натощак (между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8-ми часов, воду можно пить в обычном режиме), накануне исследования легкий ужин с ограничением приема жирной пищи.
  • Накануне исследования (в течение 24 часов) исключить алкоголь, интенсивные физические нагрузки, прием лекарственных препаратов (по согласованию с врачом).
  • За 1-2 часа до сдачи крови воздержаться от курения, не употреблять сок, чай, кофе, можно пить негазированную воду. Исключить физическое напряжение (бег, быстрый подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение. За 15 минут до сдачи крови рекомендуется отдохнуть, успокоиться.
  • Не следует сдавать кровь для лабораторного исследования сразу после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования, рентгенологического и ультразвукового исследований, массажа и других медицинских процедур.
  • При контроле лабораторных показателей в динамике рекомендуется проводить повторные исследования в одинаковых условиях – в одной лаборатории, сдавать кровь в одинаковое время суток и пр.

Противопоказания и ограничения

Абсолютных противопоказаний нет.

Интерпретация результата

Нейтрализующие антитела IgG к RBD-домену S-белка обнаружены. Это может свидетельствовать об активной фазе или перенесённой ранее инфекции, а также о наличии гуморального иммунитета после вакцинации против COVID-19.

Обратите внимание!

Верхний предел чувствительности тест-системы составляет > 40 000.0 AU/Ml.

Результат исследования, в котором указано значение > 40 000.0 AU/Ml, свидетельствует о достаточном уровне гуморального иммунного ответа. Показатели сероконверсии и периода циркуляции антител обусловлены индивидуальными особенностями организма, и нет объективных причин для их оценки у пациентов с достаточным уровнем иммунного ответа.

Источник